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邻位连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)是近几年建立的一种可以用于研究蛋白质定位、相互作用、修饰以及功能的蛋白质体外分析技术。其作用原理的基础是一对标记了寡核苷酸的抗体:依照实验目标的不同,可以选择共同辨认目标蛋白上不同抗原区、两个可能相互作用的蛋白区块,抑或是目标蛋白的修饰添加物; 而标记在抗体上的寡核苷酸则是选用能与之后加入的连接寡核苷酸 (connector oligos) 配对的序列。
以GeneTex的新产品SARS-CoV-2 Membrane Protein Proximity Ligation Assay (PLA) Kit (Cy3) (GTX537371-23) 为例说明:当两个抗体对新冠病毒膜蛋白形成双重辨认,且距离足够靠近彼此时 (<40nm) (上图步骤A),抗体上的寡核苷酸会与连接寡核苷酸配对并形成环状单链 DNA (步骤B与C)。此环状单链DNA通过设计在寡核苷酸上的启动子片段以及试剂中的 DNA 聚合酶进行滚环扩增 (Rolling Circle Amplification, RCA) (步骤D),在原位不断地制造DNA长链。经过此扩增步骤,即便细胞感染的病毒量极低,病毒膜蛋白的讯号也能增幅千倍以上。优异的灵敏度与专一性使得 PLA 技术被视为是相当具有价值的研究与诊断工具。
GeneTex的 PLA 试剂除了可以应用于新冠病毒感染组织的膜蛋白侦测之外,也适用于被感染的细胞或是膜蛋白转染细胞。如上文所述,透过 RCA 扩增后的 DNA 长链带有多处特殊序列 (上图中黄色片段),能够被 Cy3 荧光分子探针标定。因此,使用者可以轻易地使用荧光显微镜观察并撷取所需的视野,可说是相当地便利 (步骤E)。
GeneTex 有许多经充分验证的抗体与试剂。为推动基础科学与临床研究,近几年来积极投入开发传染性疾病研究领域的抗体、蛋白与试剂。欲了解 GeneTex 新冠病毒或其他研究领域的相关产品,请造访我们的网站www.genetex.com以获取更多信息。
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