Western blot
Western blot 是利用抗体与抗原间的专一性结合来侦测特定蛋白质的表现，为现代生物化学、细胞生物学、免疫遗传学中常见的实验方法，也被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。 免疫印迹试验的技术是结合蛋白质胶体电泳 (gel electrophoresis)的高度解析力、抗体的专一性以及酵素的敏感性，使得科学家们得以在复合物中大海捞针般的寻找蛋白质的存在。一开始以电泳将蛋白质进行大小排列与分离，再利用电场将蛋白质转印到膜上，接着，拥有抗原表位的蛋白质分子就可被抗体（一抗）特异性识别并与之结合。在此基础上，酶或荧光标记的二抗再进一步识别并结合一抗，通过与底物反应显色来观察目标蛋白的表现。
Western blot 若利用酵素反应呈色，由于受质的不同，显色的方法可区分为：
- 化学冷光法： Chemiluminescent-based signal detection。
- 直接呈色法： Colormetirc/Chromogen-based signal detection。
- 荧光呈色法： Fluorescent substrate-based signal detection。
发表文献上，又以化学冷光法为最常使用及最方便的呈色方法 化学冷光法(Chemiluminescent-based signal detection)的原理是利用二抗接上辣根过氧化物酶(HRP)，在H2O2存在时，HRP会氧化化学发光物质鲁米诺（lumino，氨基苯二酰一肼）而发出冷光，加上化学增强剂的作用，冷光强度可以增大1,000倍以上。化学冷光法操作简便，只需将两种显色底物等体积混合，再将转印后的膜覆盖在上进行呈色反应，后续讯号侦测可藉由底片感光、显影、定影等冲洗步骤，或是自动化光学检测仪器来得到实验结果。
GeneTex 开发的Trident HRP Substrate (化学发光底物)系列产品，原本仅供公司内实验室使用，因客户询问度高，且经过上万笔实验测试，2016年正式将其产品化，提供给客户使用。
图一： 化学发光底物作用示意图
GeneTex Trident HRP Substrate系列产品优势：
- 灵敏度高： 优于市面产品(见图), 最高可检测到飞克 (femtogram ;10-15 g)级的蛋白
- 稳定性强： A、B试剂单独存放2~8℃, 避光条件下可保存12个月
- 节约时间： 不需做条件优化, 入门新生立即可轻松上手
- 节省样品： 对于样品珍贵或是表达量少的蛋白, 仅需少量蛋白即可侦测
- 背景值低： 杂讯少, 讯号强
| 产品名 |
货号 |
应用与特色 |
灵敏度 |
包装大小 |
| Trident plus Western HRP Substrate |
GTX400006 |
一般日常操作 |
皮克 picogram
(10-10~10-12) |
500 ml |
| Trident pico Western HRP Substrate Applications |
GTX17435 |
长时间或多次曝光 |
皮克 picogram
(10-12) |
100 ml |
| Trident pico Western HRP Substrate Applications |
GTX17435 |
长时间或多次曝光 |
皮克 picogram
(10-12) |
500 ml |
| Trident femto Western HRP Substrate |
GTX14698 |
微量蛋白 |
飞克 femtogram
(10-15) |
100 ml |
| Trident femto Western HRP Substrate |
GTX14698 |
微量蛋白 |
飞克 femtogram
(10-15) |
200 ml |
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| 图二：化学发光底物飞克级蛋白测试 |
图三：化学发光底物皮克级蛋白测试 |
