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重组抗体

Recombinant Antibodies

 

重组抗体(rAb)是经由传统杂交瘤方法或展示策略的单一或结合方法,或通过许多其他技术,从免疫动物中分选的单个B细胞获得的所选单克隆抗体,经由基因克隆后,在体外表达重链和轻链产生,他被克隆的事实意味着rAb由其一级序列定义,可以对其进行改造以优化亲和力,并以不同的结合剂形式表达,rAb的众多优势已得到充分证明,最重要的就是性能的一致性。

GeneTex的rAb流程采用基于多参数FACS的方法,从免疫动物中分离出抗原特异性IgG+记忆B细胞,随后将抗体可变区基因克隆到IgG骨架中,并在哺乳动物细胞中表达,该流程非常快速,可以在数周内完成,并且还提供了在各种应用中鉴定具有多种功能的抗体的机会,重要的是,它允许从同一B细胞克隆重链和轻链,从而保留自然配对,而且一旦克隆,rAb的供应将是无穷无尽,并具有出色的可重复性。

该方案的一个突出优点是可以在筛选过程中测试各个克隆对所需应用的适用性,例如: GeneTex新开发的兔重组单克隆Iba1抗体(GTX635363)克隆号[HL22]可以检测到Iba1,该蛋白通常用作静止小胶质细胞和活化小胶质细胞的免疫组织化学染色标记,在开发和生产过程中,均有进行石蜡和冰冻切片的免疫组化分析(分别为IHC-P、IHC-Fr)的验证过程,而克隆号[HL22]被确定为这些关键应用表现最出色的(图1A-C)。将这些克隆与高度文献引用的市场领先商业抗体进行比较,以评估其性能,该策略为我们提供了该克隆在开发过程中的市场竞争力的宝贵经验,该试剂在IHC-Fr中的成功特别值得神经科学家注意,因为当前市场领先的商业抗体是兔多克隆抗体,而GeneTex的重组兔单克隆抗体具有一致性和特异性优势(图一),此外,该抗体的抗原结合区也可转换至小鼠和大鼠的 IgG骨架中使用,因此扩展了多种染色的灵活性。

Iba1 antibody [HL22](GTX635363)

图一 GeneTex的重组兔单克隆Iba1抗体[HL22] (GTX635363)在IHC-P (图A)和IHC-Fr (图B、C)方面均优于竞争对手的兔多克隆抗体(图D、E、F)。

另一种新的兔重组单克隆抗体产品是GeneTex的RAS (G12D突变体)抗体[HL10] (GTX635362),此抗体为市场上第一个通过人类胰脏肿瘤组织特异性验证的重组抗体,以石蜡包埋免疫组化(IHC-P)与蛋白质免疫印迹(WB)检测RAS G12D突变蛋白,表现出卓越的特异性(图二)。

RAS (G12D Mutant) antibody [HL10](GTX635362)

图二 (A) 通过IHC对KRAS G12D突变型胰脏肿瘤组织切片(上图)与野生型KRAS切片(下图)进行比较结果,GeneTex的重组兔RAS (G12D突变)抗体[HL10] (GTX635362)对RAS G12D突变呈现高灵敏与高特异性。图二 (B) 通过野生型和突变型KRAS确认的人类胰腺细胞提取物的WB检测,表明该抗体对RAS G12D突变具有高敏感性和高特异性,图中使用(GTX100118) GAPDH作为内参对照检测。 泳道1: HPDE. 泳道2: HPNE. 泳道3: AsPC1 (KRAS G12D). 泳道4: BxPC3 (KRAS WT). 泳道5: CFPAC1 (KRAS G12V). 泳道6: HPAC (KRAS G12D). 泳道7: HPAF-II (KRAS G12D). 泳道8: MIA PaCa-22 (KRAS G12C). 泳道9: PANC1 (KRAS G12D). 泳道10: SU86.86 (KRAS G12D).

如上所述,可以将重组抗体的抗原结合区插入各种宿主IgG骨架中,或以不同的结合剂形式(例如: Fab片段或scFv)表达,在这里,GeneTex克隆的TSG101小鼠单克隆抗体(GTX70255)被转换为兔IgG骨架(GTX635396),并保持了出色的性能,当将转化的TSG101兔IgG重组抗体与抗小鼠IgG二抗结合使用时,未观察到交叉反应(图三)。

图三 从克隆的小鼠单克隆抗体转换为兔IgG骨架

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